글로스터셔주는 사우스웨스트잉글랜드에 속한 잉글랜드의 주이다. 주도는 글로스터이다.
글로스터셔주는 크게 코츠월드 힐스, 서번 강의 비옥한 계곡 지대, 딘 숲 지대로 나뉜다. 글로스터 외에도 첼트넘, 시런세스터, 스트라우드, 튜크스베리 등의 도시가 이곳에 속한다. 북서쪽으로는 헤리퍼드셔주, 북쪽으로는 우스터셔주, 북동쪽으로는 워릭셔주, 동쪽으로는 옥스퍼드셔주, 남쪽으로는 윌트셔주, 남서쪽으로는 브리스틀과 서머싯주, 서쪽으로는 웨일스와 접한다.
종두법을 발명한 에드워드 제너가 글로스터셔주 출신이다.
